gen koji kodira protein u vrsti Homo sapiens From Wikipedia, the free encyclopedia
Protein u interakciji s dušik-monoksid sintazom je enzim koji je kod ljudi kodiran genom NOSIP.[5][6][7]
Korištenjem domena oksigenaze ljudskog ENOS (NOS3) kao mamca na 2-hibridnom ekranu kvasca u biblootetici posteljične cDNK, Dedio et al. (2001) klonirali su NOSIP. Izvedeni protein od 301 aminokiseline ima izračunatu molekulskuu masu od 34 kD. NOSIP dijeli 46% i 29% aminokiselinskih identiteta sa ortolozima C. elegans i A. thaliana. Northern blot analizom otkriven je 1,2 kb NOSIP-ov transkript koji je bio izrazito eksprimiran u ljudskom srcu i mozgu, s nižim nivoima u plućima i skeletnim mišićima. U bubrezima, jetri, gušterači i slezeni nije otkrivena bilo kakva ekspresija. Imunohistokemijska analiza pacovskovg srca otkrila je obilnu ekspresiju Nosipa u endotelnim ćelijama srčane mikrovaskulature. Western blot analiza ljudskih vaskulsdkih endotelnih ćelija pokazala je NOSIP pri prividnoj molekulskoj masi od 34 kD.
C: Cistein
D: Asparaginska kiselina
E: Glutaminska kiselina
F: Fenilalanin
G: Glicin
H: Histidin
I: Izoleucin
K: Lizin
L: Leucin
M: Metionin
N: Asparagin
P: Prolin
Q: Glutamin
R: Arginin
S: Serin
T: Treonin
V: Valin
W: Triptofan
Y: Tirozin
10 | 20 | 30 | 40 | 50 | ||||
---|---|---|---|---|---|---|---|---|
MTRHGKNCTA | GAVYTYHEKK | KDTAASGYGT | QNIRLSRDAV | KDFDCCCLSL | ||||
QPCHDPVVTP | DGYLYEREAI | LEYILHQKKE | IARQMKAYEK | QRGTRREEQK | ||||
ELQRAASQDH | VRGFLEKESA | IVSRPLNPFT | AKALSGTSPD | DVQPGPSVGP | ||||
PSKDKDKVLP | SFWIPSLTPE | AKATKLEKPS | RTVTCPMSGK | PLRMSDLTPV | ||||
HFTPLDSSVD | RVGLITRSER | YVCAVTRDSL | SNATPCAVLR | PSGAVVTLEC | ||||
VEKLIRKDMV | DPVTGDKLTD | RDIIVLQRGG | TGFAGSGVKL | QAEKSRPVMQ | ||||
A |
Koristeći uzajamnu koimunoprecipitaciju i Western blot analizu, Dedio i et al. (2001) potvrdili su interakciju između ENOS i NOSIP u kotransficiranim COS-7 ćelijama. Delecijska analiza pokazala je da je NOSIP vezao C-terminalni dio domena ENOS-oksigenaze u regiji koja se preklapala sa mjestom vezanja za kaveolin plazmamembrane. Prekomerna ekspresija NOSIP-a smanjila je proizvodnju dušik-oksida stimuliranu kalcijem u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO) koje eksprimiraju ENOS. Prekomerna ekspresija NOSIP-a također je smanjila lokalizaciju ENOS-a u membrani ćelija CHO, uzrokujući prelazak sa frakcija membrane bogatih kaveolinom u unutarćelijske odjeljke. Dedio et al. (2001) zaključili su da NOSIP promovira translokaciju ENOS-a iz plazemamembrane na unutarćelijska mjesta, čime inhibira sintezu dušik-oksida. Koristeći afinitetnu hromatografiju i masenu spektrometrijsku analizu, Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je Nosip miš stupio u interakciju sa kompleksom proteinske fosfataze-2A (PP2A) koji sadrži katalitske podjedinice Pp2aca (PPP2CA) i Pp2acb (PPP2CB), podjedinicu skele Pr65-alfa (PPP2R1A) i regulatornu podjedinicu Pr55-alfa (PPP2R2B). Eksperimenti s povlačenjem proteina potvrdili su da je Nosip taložio holoenzim PP2A. Analiza ubikvitinacije in vitro pokazala je da je Nosip djelovao kao E3 ubikvitin-ligaza u monoubikvitinaciji katalitske podjedinice PP2A. Monoubikvitinacija nije uzrokovala proteasomsku degradaciju PP2A, ali izgleda da je smanjila aktivnost PP2A, putem nerazgradivog mehanizma.
Koristeći carski rez, Hoffmeister et al. (2014) dobili su mišje embrione Day-18,5 Nosip –/– u mendelovskom omjeru, ali svi su umrli nedugo nakon rođenja, sa znakovima respiratornog distresa i cijanoza, vjerovatno zbog poteškoća s disanjem uzrokovanih ozbiljnim kraniofacijalnim malformacijama. Malformacije u miševa Nosip –/– kretale su se od očnog hipotelorizma, uske njuške, bočnog rascjepa usne i rascjepa sekundarnog nepca, do ciklopije i prisustva proboscisa ili pojedinačne izbočine nalik glavi bez likova lica. Analiza morfologije prednjeg mozga kod miševa Nosip –/– pokazala je karakteristična obilježja holoprosencefalije. Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je nedostatak Nosipa u tkivima Nosip –/– - nepca i lica, ali ne i u neoštećenom tkivu Nosip –/– pluća, povezan s povećanom aktivnošću PP2A.[8][9]
Seamless Wikipedia browsing. On steroids.
Every time you click a link to Wikipedia, Wiktionary or Wikiquote in your browser's search results, it will show the modern Wikiwand interface.
Wikiwand extension is a five stars, simple, with minimum permission required to keep your browsing private, safe and transparent.