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室町幕府（日語：室町幕府／むろまちばくふ Muromachi Bakufu），也稱足利幕府（日語：足利幕府／あしかがばくふ Ashikaga Bakufu），是日本歷史上第二個幕府政權，由足利尊氏於1338年開設，終於1573年，其間共經歷16代室町征夷大將軍（由於第10和12代將軍是同一人，所以有說是15代）。室町幕府雖然長達二百多年，但有一半時間國家處於戰亂之中，幕府並無能力去控制擁兵自重的大名，日本步入長達一個半世紀的戰國時代。
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鎌倉幕府後期，幕府內部勢力動搖，後醍醐天皇暗中決定推翻幕府的統治。正中元年（1324年），後醍醐天皇的倒幕計劃被察覺從而失敗。元弘元年（1331年），後醍醐天皇再次起兵，但又一次遭到失敗，並被流放到隱岐（現在日本島根縣隱岐島），光嚴天皇作為傀儡被幕府擁立。此時，仍有數個勢力擁護流亡的後醍醐天皇，如皇子護良親王和武士楠木正成等，與幕府的軍隊展開了戰鬥。幕府內部北條氏的御家人也開始反對幕府。足利尊氏就是其中較有實力的一方，他最初開始帶領幕府軍與反對者戰鬥，後來才倒戈支持天皇。
元弘3年，鎌倉幕府滅亡。後醍醐天皇迫使光嚴天皇退位，廢止攝政、關白的制度，自己準備開始親政，是為建武新政。然而，這些舉措觸動了武士階級的利益，造成了他們的不滿。足利尊氏借討伐鎌倉幕府殘餘勢力發動的中先代之亂，出兵關東。平定了這次叛亂之後，又以討伐新田義貞為名義，於次年攻入京都。足利尊氏在與保皇派楠木正成等人的戰鬥中一度失敗，但後來建武3年（1336年）又再度攻陷京都，擁立光明天皇、幽閉了後醍醐天皇，公佈《建武式目》，開啟。不久，後醍醐天皇從京都逃到吉野（今奈良縣吉野町），宣稱自己的正統。這時，日本出現了兩位天皇，南北朝時代開始。1338年，足利尊氏被北朝任命為征夷大將軍，於京都開設幕府。由於後來第三代將軍足利義滿在京都室町建造了花之御所作為政務場所，因此足利幕府被稱呼為「室町幕府」。[1]
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隨著南朝軍事統帥楠木正成和新田義貞戰死，即便後來出現足利直義和足利尊氏之間內鬥的觀應之亂以至兩人曾先後一度倒向南朝，以及足利尊氏之子足利直冬也起兵反抗足利尊氏，然而其後北朝在足利尊氏的孫輩足利義滿的扶持之下，仍在南北朝的內戰中獲得最終的勝利。
在室町幕府之初，足利尊氏、足利義詮作為前兩代將軍，主要著力於國內戰亂、平衡各地守護的勢力。到了第三代的足利義滿進一步削弱勢力過於強大的地方勢力，例如山名氏，室町幕府的統治得到鞏固，且足利義滿不僅擔任征夷大將軍，還兼任了公家頂級官職太政大臣。[2]
在足利義滿時期，室町幕府的行政機構也大體形成，大體上沿襲了鎌倉幕府的形式。管領主要輔佐將軍職務。其中，政所主要管理財政，侍所則負責京都內外警衛和刑事裁決。管領由細川氏、斯波氏和畠山氏輪流擔任，是為「三管領」，而侍所長官則由赤松氏、一色氏、山名氏和京極氏擔任，是為「四職」，幕府核心由「三管四職」構成。[3]
在地方行政上，室町幕府在鎌倉設立鎌倉府，最初足利尊氏三子足利基氏任鎌倉公方（關東公方）。鎌倉府在行政、司法、軍事方面具有相對的獨立性。關東公方的執事稱為關東管領，由上杉氏世襲。此外，還設有探題，如奧州探題、九州探題、羽州探題，並在各令制國設守護，在莊園設置地頭，加強對地方的管理。[4]
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經濟上，室町幕府在各地分散地設立公方御料所和政所御料所，作為其直轄領地，由足利氏的譜代家臣代管，徵收年貢。幕府也向各地守護、地頭課稅。此外，幕府還在交通要道徵收關稅。在足利義滿的時期，幕府開始在京都對高利貸行業徵收土倉稅，對釀酒行業徵收酒屋稅。[5]
日本與明朝的對外貿易也是室町幕府的重要財政收入來源。中國的元末明初時期，九州和瀨戶內海地區的武裝商人集團也從事對外貿易，不過在商業不順利的情況下，他們就變為海盜（倭寇），騷擾中國和朝鮮沿海地區。明朝建立後曾派出使者，要求室町幕府禁止倭寇。應永4年（1401年），足利義滿下令九州探題，要求禁止倭寇，同時向明朝派出使者，建立邦交。足利義滿在致明成祖朱棣的書信中自稱「日本國王臣源」，朱棣則在國書中稱呼足利義滿為「日本國王源道義」。應永11年（1404年），雙方就勘合貿易達成協議，幕府從中得到大量經濟利益。後來，一些守護大名逐漸掌握了勘合貿易的實際權力。天文20年（1551年），當時掌控勘合貿易的大內氏滅亡，勘合貿易中斷，此時倭寇又開始了活動，直到後來豐臣秀吉下令禁止。[6]
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隨著諸如鎌倉府等地方勢力的發展，室町幕府與各地勢力矛盾日益激化。1438年，足利義教出兵討伐足利持氏，史稱永享之亂。嘉吉元年（1441年），「四職」之一的赤松滿祐刺殺足利義教。儘管他很快就被幕府方面消滅，但是室町幕府的權威卻降低了。這一事件被稱為嘉吉之亂。同時期，各地的農民也發生了暴動，在日本史上稱為土一揆。幕府被迫發佈《德政令》。[7]
第八代將軍足利義政儘管在藝術上有所成就（建立了銀閣，促進了「東山文化」）[8]，卻在政治上因為繼承人的問題，在應仁元年（1467年）造成了應仁之亂。各地守護勢力日益發展，奪取了幕府在各地的莊園。幕府的勢力逐漸縮小到京都及週邊山城國一地。京都由於內戰，遭到了嚴重的損毀。各地大名的軍事實力也不斷加強，各自割據一方。日本陷入長達一個半世紀的全國性混戰，史稱戰國時代。
在這一時期，幕府將軍境遇慘淡，甚至成為大名的傀儡。永祿8年（1565年），被松永久秀和三好三人眾視為眼中釘的第十三代幕府將軍足利義輝被松永久秀和三好三人眾所弒殺。
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永祿11年（1568年），當時實力雄厚的織田信長扶植長期流亡在外的足利義輝之弟足利義昭成為第十五代幕府將軍，挾為傀儡以號令天下。足利義昭並不甘心作織田信長手中的傀儡，於是暗中聯絡各地勢力大名，意圖挑戰織田信長的權威，導致他於天正元年（1573年）被織田信長流放趕出京都。室町幕府至此滅亡。[9]雖然足利義昭被流放，但他依舊保有「征夷大將軍」的名義直至1588年他辭去此職位。故而也有人主張室町幕府的滅亡時期應為1588年而非1573年。
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