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伊莎貝爾一世[註 1]（西班牙語：Isabel I la Católica；1451年4月22日—1504年11月26日）是卡斯蒂利亞王國和萊昂王國的女王。她及丈夫兼堂弟費爾南多二世完成了收復失地運動，為日後他們的外孫查理五世統一西班牙帝國奠定了基礎。其支援克里斯托弗·哥倫布開拓美洲新大陸，為開拓發展西方世界作出重大的貢獻。另外她重用的弗朗西斯科·希梅內斯·德·西斯內羅斯樞機大力提升王權並壓制了貴族的跋扈，讓王權藉由「宗教裁判所深入到基層民眾，讓人民成為教會的順民，以及王室的順民。」
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1454年伊莎貝爾一世的父親卡斯蒂利亞王國國王胡安二世過世後，她的同父異母兄長恩里克四世繼承王位。1469年10月19日她私自和強迫堂弟阿拉貢王國王儲費爾南多二世聯姻。
1474年，恩里克四世過世，只有一個女兒胡安娜，恩里克四世被權貴們指為「不能人道，無法生育」，而胡安娜是他親信和王后的私生子。伊莎貝爾一世迅速繼承了王位。胡安娜於1475年嫁給了葡萄牙國王阿方索五世。阿方索五世因此發兵聲稱胡安娜應該繼承王位，但1476年在托羅一役徹底失敗。阿方索五世被迫簽署阿爾卡索瓦什和約，放棄對卡斯蒂利亞王國王位的一切要求。1478年伊莎貝爾一世在天主教會教宗的批准下成立西班牙宗教裁判所，迫害非天主教人士並大力提升了王權。1479年費爾南多二世 (阿拉貢)的父王過世，費爾南多二世和伊莎貝爾一世成為阿拉貢和卡斯蒂利亞王國的國王、女王。1480年這對夫婦召集群臣和34位平民代表制定了一系列法律、為未來的西班牙奠定了法理基礎。
伊莎貝拉一世任內時常召開名為「卡斯蒂利亞法院」的國家議會，並且將大部分的行政權託付給「卡斯蒂利亞王國會議」。卡斯蒂利亞王國會議的成員由王室任命，是推行專制政治的有力新工具。她與中產階級聯手對抗貴族階級，並以城鎮的民兵為其軍事力量的後盾，她又將傳統封建貴族的三大軍團交由丈夫兼堂弟費爾南多二世 (阿拉貢)掌管、壓制，解除了貴族的軍事威脅。她對於牧羊業老闆所組的「馬士達」公會堂則較為縱容，因為政府的稅收主要來自牧羊業，這種情形一直持續到新大陸的財富大量輸入西班牙之前。
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1492年1月2日，伊莎貝拉一世和費爾南多二世的軍隊攻下了統治伊比利亞半島南部七個世紀的摩爾人的最後一個重鎮格拉納達，完成在伊比利亞半島基督教勢力對伊斯蘭教勢力數個世紀的征戰收復失地運動。
同年，在對克里斯托弗·哥倫布向西航海去印度的計劃三次拒絕之後，伊莎貝拉一世終於同意資助克里斯托弗·哥倫布的探險。由於財政吃緊，伊莎貝爾一世拿出一個自己的裝滿首飾的首飾盒給克里斯托弗·哥倫布作為資助，同時答應克里斯托弗·哥倫布的條件：他和他的後代做為西班牙開拓的殖民地的總督，並獲得一成的利潤。8月3日克里斯托弗·哥倫布啟航。次年攜帶着一些美洲原住民和金凱旋，西班牙從此進入了海外冒險和殖民的地理大發現。1494年，伊莎貝拉一世和費爾南多二世通過《托德西利亞斯條約》和葡萄牙瓜分了世界。伊莎貝拉一世曾經試圖為了保護印第安人免受西班牙殖民者的虐待而組建了一個美洲原住民事務處。但後來的西班牙征服者並沒有遵守女王的規定，反而極力迫害美洲原住民。
1492年3月31日，伊莎貝拉一世和費爾南多二世頒布阿罕布拉法令，把西班牙的猶太人和穆斯林驅逐。大約有20萬人被迫離開家園，剩下的被迫皈依基督教，並在日後再次遭到迫害。
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伊莎貝爾一世和費爾南多二世在統一西班牙之後試圖利用西班牙宗教裁判所在精神層面把全國統一在天主教會之下。1502年，西班牙的穆斯林被迫在接受洗禮皈依基督教和離開西班牙之間作選擇。他們還試圖通過聯姻和歐洲其他列強聯合，以達到制衡法國和統一伊比利亞半島的目的。
伊莎貝爾一世死後把所有稱號給了女兒胡安娜繼承，胡安娜的丈夫，來自哈布斯堡王朝的美男子菲利普一世在伊莎貝爾一世死後和費爾南多二世反目，但在內戰爆發前病死。菲利普一世 (卡斯蒂利亞)的兒子神聖羅馬皇帝查理五世成為西班牙王位的繼承人，其治下的西班牙帝國達到空前的強大。
伊莎貝爾一世被安葬在格拉納達的王家教堂。
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伊莎貝拉一世和費爾南多二世育有五個子女：
- 伊莎貝爾 （1470年10月1日－1498年8月23日）——先是嫁給了葡萄牙王儲阿方索，在後者過世後嫁給了他的叔父葡萄牙國王曼努埃爾一世 (葡萄牙)，隨後因難產而過世，其子在兩歲時夭折。
- 胡安（1478年6月28日－1497年10月4日）——在和哈布斯堡王朝的奧地利的瑪格麗特結婚之後6個月過世，沒有子嗣。
- 胡安娜（1479年11月6日－1555年4月13日）——嫁給了神聖羅馬帝國皇帝馬克西米利安一世之子菲利普一世，並和後者一起統治卡斯蒂利亞。她的兒子是第一位西班牙國王查理五世 (神聖羅馬帝國)。
- 亞拉岡的瑪麗亞 (1482-1517)（1482年6月29日－1517年3月7日）——在其姐姐亞拉岡的伊莎貝爾 (1470-1498)過世後嫁給姐夫曼努埃爾一世 (葡萄牙)，育有六個子女。
- 凱瑟琳（1485年12月15日－1536年1月7日）——先是嫁給了年幼自己9個月的威爾士親王亞瑟·都鐸，在後者過世後嫁給了他的弟弟年幼自己7歲的英格蘭國王亨利八世。育有兩子兩女，他們唯一存活的子女是英國女王血腥瑪麗。
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