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1937年（昭和12年）7月，中国抗日战争爆发后，日本既有的18个步兵师团总规模不足支应多战线运用，日军随即开始在国内动员增兵；第一批增编的部队称“特设师团”，它们的编制维持与既有的步兵师相同之2旅、4联队编成，部队编组有些甚至自常备部队抽调。但为了区隔属性，单位编号是从同师管区的单位上加100，该批特设师团共增设8个步兵师团（101、104、106、108、109、110、114、116）。
第101师团是第一批增编之特设师团，在1937年9月成立，由在日本留守的留守第1师团负责整训；成军后依据上海派遣军司令官松井石根大将的要求，与第9师团、第13师团一同增援中国大陆上海战线。淞沪会战后，并未被编配入追击部队行列；在12月南京保卫战之际担任在追击部队的侧翼掩护，沿扬子江西进，在镇江市渡河至长江对岸，攻占扬州巩固出海口。
1938年（昭和13年）2月14日，第101师团编入中支那派遣军作战序列参加徐州会战。
1938年7月4日，隶属第11军，参加武汉会战和南昌会战；1938年下半年的两场会战让101师团蒙受不小的损失。1938年万家岭战役中，在8月23日与第三十七军团长兼第二十五军长王敬久军团及52师冷欣作战之际折损部分骑兵与炮兵部队；在隘口、黄塘埔一线，被第二十八军团长兼第66军军长叶肇率159师、预备师2个师包围日军第101联队，消灭步兵3千余人；在牛毛尖、钵盂山留守的日军辎重兵第101联队、工兵第101联队，则被同属国民革命军第六十六军之160师（师长华振中少将）伏击，日军第101联队、第103联队及其大中小队彻底消失，全军覆没。后因第27师团支援，师团大部分兵力才成功脱离包围圈。
1939年（昭和14年）11月7日残馀兵力复员，番号虚空保留。
1940年（昭和15年）2月25日番号编制撤销。
- 伊东政喜 预备役中将：1937年（昭和12年）9月3日 - 1938年（昭和13年）11月9日，参谋长西山福太郎大佐。
- 齐藤弥平太 中将：1938年（昭和13年）11月9日 - 1940年（昭和15年）2月25日
- 秦郁彦编《日本陆海军总合事典》第2版、东京大学出版会、2005年。
- 外山操、森松俊夫编著《帝国陆军编制总览》芙蓉书房出版、1987年。
- 铃木淳、古川隆久、刘杰编《第百一师団长日志 伊东政喜中将の日中戦争》（中央公论新社、2007年） ISBN 978-4-12-003835-8
- YAHOO武汉会战[永久失效链接]
- 阳光卫星电视台 纪录片 国殇 第十八集 （页面存档备份，存于互联网档案馆）
- 大日本帝国陆军师团列表
- 武汉会战
- 万家岭战役惨遭重创
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