Josefine Preuß è nata a Zehdenick, Brandeburgo, in Germania, vicino a Berlino. Il suo ruolo principale è stato quello in Schloss Einstein, una trasmissione televisiva per bambini in cui ha interpretato Anna Reichenbach, dal 1999 al 2001. La Preuß ha anche preso parte a molti altri film e trasmissioni come Abschnitt 40 o The School Trip. Dopo aver vinto un premio della televisione tedesca nel 2005, ha interpretato Lena, il personaggio principale, nella commedia televisiva familiare Kebab for Breakfast. Come Josi ha condotto Quergelesen, uno show televisivo per bambini riguardante libri. Ha recitato anche in French kissing - A caccia di baci nel ruolo della francese Sophie.
Ha recitato nel film tedesco del 2007 Stühle im Schnee nel ruolo di Klara, una quattordicenne vittima di abusi da parte di Thomas, un trentenne, oltre che nel film comico in ProSieben FunnyMovie - Eine wie keiner, distribuito in Germania nel marzo 2008, in cui interpreta Melli, una impacciata ragazza occhialuta che si trasferisce in una grande città ed è vista come una strana e poco popolare.
Cinema
Jargo, regia di Maria Solrun (2004)
Afterhour, regia di Irma Stelmach – cortometraggio (2006)
Stühle im Schnee, regia di Florian Anders – cortometraggio (2007)