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Metodo di analisi delle proteine del sangue Da Wikipedia, l'enciclopedia libera
In chimica e in medicina, l'elettroforesi proteica è un metodo d'analisi delle proteine presenti nel sangue e nel siero. È un metodo di separazione di particelle cariche elettricamente, che avviene attraverso elettroforesi, cioè tramite il passaggio continuo di corrente elettrica in una soluzione.
L'attrezzatura necessaria per eseguire una separazione elettroforetica è costituita da:
Questo tipo di analisi viene svolta utilizzando vari tipi di supporto, in particolare con acetato gelatinizzato e il gel d'agarosio. Ultimamente viene sempre più usata l'elettroforesi su capillari direttamente da provetta primaria, a vantaggio della preparazione del campione e della velocità di analisi.
Le particelle cariche migrano verso l'elettrodo di carica opposta con una velocità di migrazione o mobilità elettroforetica legata a numerosi fattori dipendenti dalla natura del mezzo e dal campo elettrico applicato e soprattutto dalla massa, dalle dimensioni, dalla carica e dalla forma delle varie particelle. Nell'elettroforesi le proteine reagiscono come molecole elettricamente cariche in soluzione acida o alcalina: esse sono infatti polimeri di amminoacidi, e quindi presentano dei gruppi carbossilici e gruppi amminici. In base al pH della soluzione tampone, dove scorre la corrente, possono essere indotte cariche negative o positive. In particolare in una soluzione alcalina il gruppo carbossilico della molecola viene neutralizzato secondo la reazione:
-COOH + OH- → -COO- + H2O
formando ioni negativi che lasceranno nella proteina una netta carica negativa. In una soluzione leggermente acida, invece, il gruppo amminico associa un protone come si nota nella reazione:
-NH2 + H+ → -NH3+
formando così ioni -NH3+ e quindi lasciando sulla molecola una carica nettamente positiva.
Volendo effettuare una siero-elettroforesi si impiega un tampone a pH alcalino il quale conferisce alle molecole proteiche una carica negativa rendendole solubili senza sottoporle a denaturazione.
Esistono due classi principali nelle sieroproteine: albumina e globuline.
Solitamente albumina e globuline sono in proporzioni simili, ma l'albumina è molto più corta, e carica negativamente mostrando una concentrazione visiva maggiore. Esiste inoltre una piccola banda superiore all'albumina chiamata pre-albumina.
Le globuline sono classificate a seconda delle bande relative:
Albumina | 55,0 - 68,0 % |
alfa1-antitripsina | 1,5 - 5,0 % |
alfa-acroglobulina | 6,0 - 12,5 % |
Aptoglobina | 0,34 - 2,00 % |
Transferrina | 2,0 - 3,8 % |
Complemento C3 | 0,75 - 1,40 % |
Immunoglobulina G | 6,9 - 14,0 % |
Immunoglobulina A | 0,88 - 4,10 % |
Immunoglobulina M | 0,34 - 2,10 % |
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