Ha recitato in oltre 60 film dal 1951 al 1976 ed è apparso in oltre 110 produzioni televisive dal 1951 al 1976. È stato accreditato anche con il nome Bert Mustin.[2]
Figlio di un agente di cambio, si laureò al Pennsylvania Military College nel 1903 in ingegneria civile. Lavorò per qualche tempo come ingegnere e, dal 1916, come venditore di auto. Quando l'industria automobilistica cominciò a soffrire a causa della seconda guerra mondiale passò a lavorare come agente finanziario per il Better Business Bureau e per la Camera di Commercio. Nel 1921 diventò presentatore di uno spettacolo di varietà in onda su una stazione radio di Pittsburgh e cominciò ad apparire in produzioni teatrali nell'area natia. Divenne inoltre un membro della Barbershop Harmony Society. Dopo essere andato in pensione, Mustin si trasferì a Tucson, in Arizona. Qui fu contattato dal regista William Wyler, che lo aveva notato in una produzione teatrale di Detective Story. Wyler gli chiese di interpretare una parte nella trasposizione cinematografica dell'opera e Mustin accettò. Fece quindi il suo debutto a 67 anni nel mondo del cinema nel film Pietà per i giusti (1951).
Intraprese poi in parallelo una prolifica carriera televisiva interpretando molti personaggi, in gran parte secondari, in numerosi episodi di serie televisive degli anni 50 agli anni 70, per lo più ruoli di anziani o personaggi in età avanzata. Per la televisione, interpretò, tra gli altri, il ruolo di Mr. Finley in 7 episodi della serie televisiva Date with the Angels (1957-1958), di Gus il pompiere in 14 episodi della serie Ci pensa Beaver (1957-1962), di Jud Fletcher in diversi episodi della serie The Andy Griffith Show (1960-1966), di nonno Jenson in 3 episodi della serie Petticoat Junction (1968), di Justin Quigley in 4 episodi della serie Arcibaldo (1973-1976), più un altro episodio con un altro ruolo, e di Arthur Lanson, il corteggiatore e poi marito di Sally "Mother" Dexter, in 3 episodi della serie Phyllis (1976).
La sua ultima apparizione sul piccolo schermo avvenne nell'episodio Mother Dexter's Wedding della serie televisiva Phyllis, andato in onda il 6 dicembre 1976, mentre per il grande schermo l'ultima interpretazione risale al film western Baker's Hawk (1976), in cui interpretò un generale.