SYPRO Orange

SYPRO Orange ist ein Fluoreszenzfarbstoff vom Merocyanin-Typ,^[1] der im Zuge einer Proteincharakterisierung zur Proteinfärbung verwendet wird,^[2] meistens in einer SDS-PAGE.^[4][5]

Struktur von SYPRO Orange.^[1] Laut Patent ist m = 2 – 10, n = 3 – 4,^[2] laut Kroeger et al. ist m = 6 und n = 3.^[3]

Eigenschaften

SYPRO Orange bindet wie auch sein Analogon SYPRO Red selektiv an Proteine über 6,5 Kilodalton (auch Glykoproteine) in SDS-Micellen,^[1] nicht jedoch an DNA oder Lipopolysaccharide.^[6][7] SYPRO Orange ist gemäß Verordnung (EG) Nr. 1272/2008 (CLP) nicht als gefährlich eingestuft,^[6] da seine Toxizität und Mutagenität aufgrund der geringen Produktionsmenge unbekannt ist. Das Absorptionsmaximum liegt bei λ = 470 nm, die Emission ist bei λ = 569 nm maximal.^[8] Die Sensitivität bei SDS-PA-Gelen liegt mit SYPRO Orange bei etwa 4–8 ng Protein,^[6][9] also etwas schlechter als bei der Silberfärbung. Aufgrund der Fluoreszenz besitzt die SYPRO Orange-Färbung bei einer Mengenabschätzung im Vergleich zur Silberfärbung oder Coomassie einen größeren linearen dynamischen Bereich, d. h. eine bessere Korrelation zwischen der Proteinmenge und der Signalintensität.^[6] SYPRO Orange eignet sich nicht zur Färbung von Proteinen auf Western Blots, 2D-Gelen oder IEF-Gelen.^[6] Im Gegensatz zur Silber- und Coomassie-Färbung werden zur Fixierung vor einer Färbung zwar auch Essigsäure, aber keine Alkohole wie Methanol oder Ethanol verwendet, da SYPRO Orange zur Färbung auf die Anwesenheit von SDS angewiesen ist.^[9] SYPRO Orange wird als 10 mM Lösung in Dimethylsulfoxid geliefert.^[10]