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DNA-Ligase des Bakteriophagen T4 Aus Wikipedia, der freien Enzyklopädie
Die T4-DNA-Ligase ist ein Enzym aus der Gruppe der DNA-Ligasen und wird vom Enterobakterienphagen-T4 gebildet.[1]
T4-DNA-Ligase | ||
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Andere Namen |
Polydeoxyribonucleotide synthase [ATP], T4 gene 30 product | |
Masse/Länge Primärstruktur | 487 Aminosäuren, 55.293 Da | |
Bezeichner | ||
Externe IDs | ||
Enzymklassifikation | ||
EC, Kategorie | 6.5.1.1 | |
Orthologe (Mensch) | ||
Entrez | 1258680 | |
UniProt | P00970 | |
Refseq (Protein) | NP_049813.1 | |
PubMed-Suche | 1258680
|
Die T4-DNA-Ligase wird in infizierten E. coli zu Beginn des lytischen Zyklus des T4-Phagen gebildet. Sie erzeugt je eine Phosphodiesterbindung zwischen zwei aneinandergrenzenden DNA-Sequenzen in DNA-Doppelsträngen und dient den Bakteriophagen zur DNA-Replikation, Rekombination und zur DNA-Reparatur. Cofaktoren sind zweiwertige Magnesiumionen. Die T4-DNA-Ligase fügt sowohl blunt ends als auch sticky ends doppelsträngiger DNA, RNA und DNA-RNA-Hybriden zusammen, einzelsträngige DNA oder RNA jedoch nur in geringem Umfang.[2] Der Doppelstrang muss dafür mindestens 5 gepaarte Nukleinbasen aufweisen.[3] Eine durch Proteindesign modifizierte T4-DNA-Ligase, die als Fusionsprotein mit NFκB p50 erzeugt wurde, besitzt eine 160-fach erhöhte Enzymaktivität.[4]
Die T4-DNA-Ligase katalysiert die Reaktion:[5]
ATP + (Desoxyribonukleotid)(n)-3'-hydroxyl + 5'-Phospho-(desoxyribonukleotid)(m) (Desoxyribonukleotid)(n+m) + AMP + Diphosphat
Die T4-DNA-Ligase wird im Zuge einer Klonierung oder einer künstlichen Gensynthese zur Ligation zweier DNA-Doppelstränge aneinander verwendet (mit 1 mM ATP und 10 mM Mg2+). Sticky ends werden dabei etwa zwölfmal schneller ligiert als blunt ends (10 min vs. 2 h). Eine thermostabile DNA-Ligase zur Verwendung in Polymerasekettenreaktions-basierten Methoden ist die Taq-DNA-Ligase aus Thermus aquaticus.
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