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一種以抗原及抗體結合之高專一性,並以酵素進行呈色的分析方法 来自维基百科,自由的百科全书
酶聯免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)又稱酵素免疫分析法,簡稱酶聯法、酶免[1],是利用抗原抗體之間專一性鍵結之特性,對檢體進行檢測的分析方法;由於結合於固體承載物(一般為塑膠孔盤)上的抗原或抗體仍可具有免疫活性,因此設計其鍵結機制後,配合酵素呈色反應,即可顯示特定抗原或抗體是否存在,並可利用呈色的深淺進行定量分析[2][3]。
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酶聯法的一項重要應用為用於HIV檢測,其檢測的蛋白一般為HIV的p24蛋白 (P24 capsid protein)。根據待測樣品與鍵結機制的不同,ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式,主要以三明治法(sandwich)、間接法(indirect)、以及競爭法(competitive)三種為主。
三明治法常用於檢測大分子抗原,一般之操作步驟為:
三明治法分別以兩種抗體對檢體中的抗原進行兩次專一性辨認,因此專一性相當高,但此待測抗原必須是多價抗原,如此才可獲得兩種以上的專一性抗體,以分別進行夾心;而且此法需要足夠的表位空間以進行抗原抗體的夾心,所以並不適用於半抗原或小分子抗原等分子量較小之標的。
間接法常用於檢測抗體,一般之操作步驟為:
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用於檢測小分子抗原,其操作步驟為:
當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時,一般會考慮使用競爭法ELISA。
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