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薩瑟恩印跡法,或南方印跡法(英語:Southern blot),是由英國生物學家埃德溫·薩瑟恩於1975年發明,並因此得名,是一種普及的分子生物學實驗技術。目的是偵測經由膠體電泳分離的樣品中,含有特測序列的脫氧核糖核酸片段。
通常,先利用膠體電泳分離脫氧核糖核酸(DNA)樣本中各種不同大小的分子。不同大小的分子在膠體電泳之後,會分離而散佈在膠體上不同的位置。接着,這些DNA分子可以利用虹吸作用,轉染到一個薄膜上,經由DNA變性使它們的雙股分開。因為雙股DNA已經固定在薄膜上,所以變性後無法再形成雙股螺旋;然後將上述薄膜暴露在雜交探針(probe)裏,讓探針和DNA雜交(hybridize)。探針是會產生放射線、或可以放出顏色或熒光的物質標記的單股DNA或核糖核酸(RNA)片段;最後是觀察結果。薄膜上可以偵測到放射性或者熒光訊號的位置,就是含有可以與探針核酸序列進行偶合的脫氧核糖核酸樣本散佈的位置。
薩瑟恩雜交是利用標記的探針(probe)與轉印膜上靶DNA片段進行雜交的技術,檢測DNA片段中是否存在與探針同源的序列。雜交過程是高度特異性的,可以根據所使用的探針(序列已知)進行特異性的靶序列檢測。
這裏介紹兩種常用的轉印方法:毛細轉印和電轉印法。
早期薩瑟恩印跡法是使用毛細轉印法,經虹吸作用,轉移到NC(硝酸纖維)膜上。
轉印法經過改良後,快速簡便的電轉印法如今應用的更加普遍。
雜交前封閉膜上非特異性雜交位點,減少其對探針的非特異吸附。
鹽濃度、溫度、次數、體積
陽離子尼龍膜
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