多重聚合酶鏈式反應（英語：Multiplex Polymerase Chain Reaction, Multiplex PCR）是指利用聚合酶鏈式反應同時擴增數個不同的DNA序列（像在同一個反應中進行許多單獨的聚合酶鏈式反應）。該過程使用多個引子和溫度敏感的DNA聚合酶在循環熱儀裏複製樣品中的DNA。其中使用的的所有引子必須特別設計以符合相同的黏合溫度。
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1988年，多重PCR首次被用來檢測肌肉萎縮症基因缺陷的方法[1]。它也被用來檢測類固醇硫酸酯酶
基因[2]。 2008年，多重PCR技術開始被用來分析微衛星和SNP[3]。2020年，美國疾管局使用了反轉錄多重PCR技術來針對 SARS-CoV-2 病毒中的多個基因標的進行檢測，此技術增加了單一測試的目標數量和樣品通量大小。[4]
多重PCR的一組反應物中包含多個引子組，能夠針對不同DNA序列放大出大小不同的擴增子，進而可以從單次測試中獲得原本需要更多時間和耗材的反應結果。每個引子組的黏合溫度必須特別設計，以在同個反應中正確放大目標，另外擴增子的大小（即其產物鹼基長度）應有足夠的差異，以便在凝膠電泳的結果中分辨為不同的條帶。如果擴增子大小太相近，則可選擇使用帶有不同顏色的熒光標定的引子來區分不同的擴增子。市面上已有用於多重PCR的試劑組，並被許多法醫實驗室用來放大已被分解的DNA樣品。
應用
多重PCR的一些應用包括：
- 病原鑑定：例如下呼吸道感染的病人往往在微生物培養前常已使用了抗生素，有時不容易培養出致病菌。2006年時Stralin、Korsgaard、Olcen等人以多重PCR檢測支氣管肺泡沖洗液（bronchoalveolar lavage, BAL）中的S. pneumoniae（lytA, 229 bp）、M. pneumoniae（Pl, 483 bp）、C. pneumoniae（ompA, 368 bp）及H. influenzae（16S rRNA gene, 538 bp）（括弧為基因標的及PCR產物長度）。在156個下呼吸道感染病人檢體中，以傳統方式培養出C. pneumoniae（ompA, 368 bp）、M. pneumoniae（Pl, 483 bp）、S. pneumoniae（lytA, 229 bp）及H. influenzae之比例分別為0%、3.2%、14%及21%。若以多重PCR則檢測上述四種病原菌，則檢出率分別為0.6%、3.2%、28%及47%。值得注意的是103個已使用抗生素的病人中，培養法只檢出2.9%的檢體有S. pneumoniae，顯示這個方法對已接受抗生素治療的病人特別有效果[5]。
- 高通量SNP基因分型
- 變異分析
- 基因缺失分析
- 模板定量
- 連鎖分析
- RNA檢測
- 法醫研究
- 飲食分析
參考文獻
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