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在化學中，分光光度法（英語：Spectrophotometry）是材料的反射或透射特性隨波長變化的定量測量[2]。它比一般的電磁光譜法更具體，因為分光光度法處理可見光，近紫外光和近紅外光，但不包括時間分辨光譜技術。
分光光度法是一種工具，取決於對有色化合物吸收多少光，對分子進行定量分析。 分光光度法使用稱為分光光度計的光度計，該光度計可以測量光束強度作為其顏色（波長）的函數。分光光度計的重要特徵是光譜帶寬（它可以透射通過測試樣品的顏色範圍），樣品透射率的百分比，樣品吸收率的對數範圍，有時還包括反射率測量的百分比。
分光光度法通常用於測量溶液，透明或不透明固體（例如拋光玻璃）或氣體的透射率或反射率。
分光光度法的使用涉及多個科學領域，例如物理學，材料科學，化學，生物化學，化學工程，和分子生物學[3]。 它們被廣泛用於許多行業，包括半導體，激光和光學製造，印刷和法醫檢查以及化學物質研究實驗室。 分光光度法通常用於酶活性的測定，蛋白質濃度的測定，酶動力學常數的測定以及配體結合反應的測定。最終，分光光度法能夠根據對照或校準物來確定什麼 通過計算觀察到的波長，目標中存在的物質以及確切的數量。
將含有各種波長的混合光分散為各種單色光，使每種單色光依次通過某一濃度溶液，測定溶液對每種光波的吸光度，繪出吸收光譜。由於物質的吸收光區域和強度與結構密切相關，根據特有的吸收光譜可作分子結構分析。此外，利用特定波長的單色光分別透過標準溶液與待測溶液，比較其吸光度，可作定量分析。
分光技術中包括了分光光度計（英語：spectrophotometer）是一種分析光的強度的物理實驗室設備，可以量測不同波長光的強度，分析波長與光強度的關係。亦可以量測特定物質的吸光度或透光度。目前有許多種分光儀，如指針型、數字型。
紫外-可見分光光度法（Ultraviolet–visible spectroscopy，縮寫：UV-Vis），又稱「紫外-可見分子吸收光譜法」，是以紫外線-可見光區域電磁波連續光譜作為光源照射樣品，研究物質分子對光吸收的相對強度的方法。通過分子紫外-可見分子吸收光譜法的分析可以進行定性分析，並可依據朗伯-比爾定律進行定量分析。
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