聚合酶鏈式反應
從少量短寡核苷酸引物產生大量特異性脱氧核醣核酸或核糖核酸片段的體外方法 / 維基百科,自由的 encyclopedia
聚合酶連鎖反應(英語:Polymerase chain reaction,縮寫:PCR)又稱多聚酶鏈式反應,是一項利用DNA雙鏈複製的原理,在生物體外複製特定DNA片段的核酸合成技術。透過這項技術,可在短時間內大量擴增目的基因(標的基因)[1][2],而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。DNA 體外擴增的實現首先基於DNA半保留複製原理,還有鹼基互補配對原則,即複製的過程中雙鏈DNA會解鏈,由雙鏈變成單鏈,溫度一般為95℃;之後溫度降下來,引物會結合到DNA單鏈上,在DNA聚合酶的作用下,把游離的dNTP按照鹼基互補配對原則結合到單鏈上,形成一條由舊鏈和新鏈雜合成的新的雙鏈DNA。這個過程可概括為變性、黏合、延伸三個基本步驟。
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PCR是一種簡單,廉價和可靠的複製DNA片段的方法, 可能也是分子生物學中使用最廣泛的技術。這個概念適用於現代生物學和相關科學的許多領域[3],如生物醫學研究,犯罪取證和分子考古學[4]等。
微生物複製是一個費時耗力的流程。首先要將DNA經限制酶剪裁,再利用連接酶(Ligase)加到運載體(Vector)中,之後利用受控電脈衝瞬間電擊,在質膜上形成可逆性微孔的「電穿孔」(electroporation)或是利用生理極限高溫刺激的「熱休克」(heat shock)的方式,送到大腸桿菌感受態細胞(competent cell)中,將此菌於培養皿大量繁殖培養,再經過繁複的分離、純化過程,時間通常需要近一週,才能大量複製片段[5]。所以僅需一小時的PCR能節省大量時間和繁複的操作,聚合酶鏈式反應技術被廣泛地運用在醫學和生物學的實驗室,例如用於判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因複製,以及親子鑑定。