Tečna hromatografija visokih performansi
From Wikipedia, the free encyclopedia
Tečna hromatografija visokih performansi (, tečna hromatografija pod visokim pritiskom) je oblik kolonske hromatografije koji se često koristi u analitičkoj hemiji. je tehnika koja se koristi za razdvajanje, identifikaciju i kvantifikaciju komponenti iz smese na osnovu hemijskih interakcija između supstance koja se analizira i stacionarne faze u koloni.[1][2][3][4][5]
. Sa leva na desno: Uređaj za pumpanje formira gradijent dva različita rastvarača, čelikom pojačana kolona i aparat za merene apsorbance. | |
Akronim | |
---|---|
Klasifikacija | Hromatografija |
Uzorci | organski molekuli biomolekuli joni polimeri |
Druge tehnike | |
Srodno | Hromatografija Hromatografija vodene normalne faze Hromatografija sa hidrofilnim interakcijama Jonoizmenjivačka hromatografija Ekskluziona hromatografija Micelarna elektrokinetička hromatografija |
Pun naziv | Tečna hromatografija-masena spektrometrija |
![Thumb image](http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/a/a0/HPLC_apparatus.svg/640px-HPLC_apparatus.svg.png)
![Thumb image](http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/thumb/4/4b/Agilent1200HPLC.jpg/640px-Agilent1200HPLC.jpg)
Najvažnija komponenta svakog sistema je pumpa koja propušta tečni rastvarač koji sadrži uzorak smeše kroz kolonu ispunjenu čvrstim adsorbentnim materijalom. Svaka komponenta u uzorku interaguje na nešto drugačiji način sa adsorbentnim materijalom, uzrokujući različite brzine protoka za različite komponente i dovodeći do razdvajanja komponenata dok izlaze iz kolone.
HPLC se koristi u različite svrhe, uključujući proizvodnju (na primer, tokom procesa proizvodnje farmaceutskih i bioloških proizvoda), pravne svrhe (na primer, detekciju doping supstanci u urinu), istraživanje (na primer, separaciju komponenata kompleksnih bioloških uzoraka ili sličnih sintetičkih hemikalija), i medicinske svrhe (na primer, detekciju nivoa vitamina D u krvnom serumu).[тражи се извор] Hromatografija se može opisati kao proces masenog prenosa koji uključuje adsorpciju. HPLC se oslanja na pumpe koje propuštaju pritisnutu tečnost i uzorak smeše kroz kolonu ispunjenu adsorbentom, što dovodi do separacije komponenata uzorka. Aktivna komponenta kolone, adsorbent, obično je granularni materijal sastavljen od čvrstih čestica (na primer, silika, polimeri, itd.) veličine od 2–50 μm. Komponente uzorka se separišu zbog njihovih različitih interakcija sa česticama adsorbenta. Pritisnuta tečnost obično predstavlja mešavinu rastvarača (na primer, vodu, acetonitril i/ili metanol) i naziva se "pokretna faza". Njena kompozicija i temperatura igraju značajnu ulogu u procesu separacije, utičući na interakcije koje se odvijaju između komponenata uzorka i adsorbenta. Ove interakcije su fizičke prirode, kao što su hidrofobne (disperzivne), dipol-dipolne i ionske, često u kombinaciji. HPLC se razlikuje od tradicionalne ("niskopritisne") tečne hromatografije jer su operativni pritisci značajno viši (50–350 bara), dok obična tečna hromatografija obično zavisi od gravitacione sile za prolazak pokretne faze kroz kolonu. Zbog male količine uzorka koji se separiše u analitičkoj HPLC, tipične dimenzije kolone su prečnika 2.1–4.6 mm i dužine od 30–250 mm. Takođe, HPLC kolone se prave sa manjim česticama adsorbenta (prosečne veličine od 2–50 μm). Ovo daje HPLC superiornu moć razdvajanja (sposobnost razlikovanja između jedinjenja) prilikom separacije smeša, što je čini popularnom hromatografskom tehnikom. Shema HPLC instrumenta obično uključuje degazer, uzorkivač, pumpe i detektor. Uzorkivač unosi smešu uzorka u tok pokretne faze koja je nosi kroz kolonu. Pumpe obezbeđuju željeni protok i kompoziciju pokretne faze kroz kolonu. Detektor generiše signal koji je proporcionalan količini komponenti uzorka koje izlaze iz kolone, omogućavajući kvantitativnu analizu komponenata uzorka. Digitalni mikroprocesor i korisnički softver kontrolišu HPLC instrument i pružaju analizu podataka. Neki modeli mehaničkih pumpi u HPLC instrumentu mogu mešati više rastvarača u različitim odnosima tokom vremena, stvarajući gradient kompozicije u pokretnoj fazi. Različiti detektori se često koriste, kao što su UV/Vis, fotodiodni niz (PDA) ili masena spektrometrija. Većina HPLC instrumenata takođe ima kolonsku pećnicu koja omogućava podešavanje temperature na kojoj se separacija vrši.