Изоэлектрическое фокусирование

Изоэлектрическое фокусирование (ИЭФ, англ. IEF), или электрофокусирование — технология разделения молекул (чаще всего — белков) по разнице в их изоэлектрических точках. Это разновидность зонного электрофореза, которую обычно производят в геле. Белок, который находится в рН-зоне ниже собственной изоэлектрической точки, будет положительно заряжен и будет перемещаться к катоду. В результате перемещения заряд молекулы будет снижаться, а перемещение — замедляться. В результате белки образуют четкие полосы, и каждый белок будет располагаться в градиенте значений рН в соответствии со своей изоэлектрической точкой. Данная технология дает возможность очень чёткого разделения белков, отличающихся по изоэлектрической точке.

Схема изоэлектрического фокусирования

Применение

Метод применяют для изучения белков, которые отличаются значениями изоэлектрической точки, то есть соотношением остатков кислых и основных аминокислот. Белки наносят на иммобилизованный градиент рН полиакриламидного или агарозного геля. Изоэлектрическое фокусирование позволяет разделить белки, отличающиеся по изоэлектрическим точкам менее, чем на 0,01.^[1] Изоэлектрическое фокусирование является первым этапом в проведении двумерного электрофореза, при котором белки сначала разделяют по изоэлектрическим точкам, и далее — по молекулярной массе с помощью электрофореза в полиакриламидном геле.

Примечания

1. Stryer, Lubert: «Biochemie», page 50. Spektrum Akademischer Verlag, 1996 (German)

См. также

• Электрофорез

Ссылки

• Подробности изоэлектрического фокусирования (недоступная ссылка)