Citoquímica

As técnicas citoquímicas consistem num corte de tecido (pela rotina histológica) aderido a uma lâmina na qual se irá incubar diferentes reagentes (corantes e não corantes).

Citoquímica é o estudo da composição química celular e dos processos biológicos a nível molecular que se desenrolam no interior das células ainda que também se inclua aqui a área de histoquímica (coloração em tecidos) uma vez que os tecidos são constituídos por células. A citoquímica dedica-se ainda à identificação e localização dos compostos químicos e macromoléculas nas células. Esse estudo só é possível usando diferentes reagentes que, ao reagirem com as estruturas do tecido, permitem identificar as substâncias/estruturas em estudo bem como a sua localização.

Controlos e contrastante

Para se realizar a técnica e esta ser válida há a necessidade de incluir um controlo positivo - um corte em que previamente sabemos existir a substância/estrutura a detetar e que por isso o resultado deve ser positivo. O controlo negativo é utilizado em apenas algumas técnicas e consiste num corte de tecido onde não existe a substância/estrutura ou esta foi retirada por processos químicos/físicos e que irá demonstrar se existe coloração inespecíficas, ou seja, estruturas que não devem corar por uma técnica, coram.

Normalmente, aquando da coloração é também incubado o corte com um contrastante, um corante de uma cor totalmente diferente da da estrutura/substância e que permite uma localização histológica da mesma no tecido.

Técnicas

Há diversas tipos de técnicas, sendo uma delas a impregnação argêntica que apesar de não se tratar de uma coloração mas sim uma deposição de pigmentos ao redor da substância/estrutura a detetar é incluída nas técnicas de coloração. Nesta técnica é utilizado o fator da deposição da prata metálica que depois é substituída por cloreto de ouro para que a coloração possa permanecer igual mesmo quando exposta à luz (exemplo : metanamina prata).
Uma técnica cuja deteção não é feita pela coloração da substância mas sim da falta da mesma é o PAS, em que é utilizado dois cortes em que um é feita a incubação com diastase que irá digerir o glicogénio e retirá-lo do corte. Assim, sabendo que o o glicogénio é corado com rosa (como o restante corte) quando no corte tratado com diastase há espaços brancos, estes são atribuídos ao glicogénio.

São diversas as técnicas existentes como:

Técnica	O que detecta?	Controlo positivo	Cores da coloração
Giemsa	Células hematopoiéticas	Medula óssea e baço	Núcleos - azul; granulações acidófilas - rosa; granulações basófilas - azul
Reticulina	Fibras reticulares	Tecido hepático	Fibras de reticulina - preto; núcleos - vermelho
Orceína	Fibras elásticas	Tecido pulmonar, artérias de grande calibre	Fibras elásticas - castanho escuro; núcleos - azul; fibras de colagénio e restantes estruturas - incolores
Tricómio de Masson	Fibras de colagénio	Útero, apêndice	fibras - azul; núcleos - azul/preto; músculo, citoplasma, eritrócitos e queratina - vermelho; grânulo argirófilos - preto ou vermelho
Metanamina Prata	Membrana Basal	Rim	membranas basais - preto; fundo - verde ou vermelho
PAS com e sem diastase	Glicogénio	Fígado	núcleos - azul; mucinas neutras e algumas mucinas ácidas - magenta; membrana basal - magenta; parede de fungos - magenta; glicogénio - magenta no sem diastase e incolor no com diastase
Azul de Alcian pH=1	Mucinas ácidas sulfatadas	Intestino delgado	mucinas ácidas sulfatadas - azul pálido; núcleos - rosa avermelhado
PAS com Azul de Alcian	Mucinas ácidas e neutras	Rim	Mucinas ácidas - azul; mucinas neutras - magenta; mistura de mucinas ácidas e neutras - púrpura; núcleos - azul pálido
Vermelho de congo	Amilóide	Tecido com amilóide (é uma substância - parte de patologia)	núcleos - azuis; amilóide - vermelho (com o polarizador é verde birrefringente - amarelo)
Oil Red	Lípidos neutros	Qualquer um (todos os tecidos contêm lípidos	Lípidos - vermelho; núcleos - azul
Perl's	Pigmentos férricos	Pulmão ou fígado com patologia	pigmento férrico - azul de prússia; citoplasma (fundo) - rosa avermelhado
Halls	Pigmentos biliares	Fígado ou vesícula biliar	bilirrubina (pigmento biliar) - verde esmeralda; colagénio - vermelho; citoplasma (fundo) - amarelo
Zhieh-Neelson	Micobactéria AAR	Tecido infectado pelo M.Tuberculosis	micobactérias - rosa avermelhado; componentes acidófilos (fundo) - verde
Giemsa modificado	Helicobacter pylori	Tecido gástrico infectado	Microorganismos tipo Helicobacter pylori - azul escuro; fundo - vários tons de azul
LEDER	Atividade da cloroacetato esterase	Medula óssea e apêndice com inflamação aguda	atividade enzimática das células mielóides - vermelho brilhante; monócitos e linfócitos - ausente/intensidade fraca; núcleos - azul
Luxol Fast Blue	Mielina	Cérebro, medula espinhal ou nervo periférico	mielina - azul turquesa; células nervosas - púrpura; neutrófilos - rosa

Bibliografia

• Bancroft - Theory and Practice of Histological Techniques