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La cromatografía ye un métodu físicu de separación pa la carauterización d'amiestos complexos, que tien aplicación en toles cañes de la ciencia; ye un conxuntu de téuniques basaes nel principiu de retención selectiva, que'l so oxetivu ye dixebrar los distintos componentes d'un amiestu, dexando identificar y determinar les cantidaes de dichos componentes. Diferencies sutiles nel coeficiente de partición de los compuestos dan como resultáu una retención diferencial sobre la fase estacionaria y, poro, una separación efectiva en función de los tiempo de retención de cada componente del amiestu.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básiques que nun s'esclúin mutuamente:
La cromatografía, como indica'l so nome (provién del griegu χρῶμα chrōma y γράφω gráphō, que signifiquen respeutivamente "color" y "escribir, rexistrar", lliteralmente "escritura de color", o meyor "rexistru de color") , foi emplegada orixinalmente con sustancies coloriaes.
Yá en 1850, Runge describió la formación de zones coloriaes cuando se depositaben gotes de sustancies colorantes sobre papel secante, pero'l desenvolvimientu más importante vinu colos esperimentos de Mijaíl Tsvet[1] (1872-1919), qu'emplegó per primer vegada en 1906 el términu "cromatografía". A empiezos del añu 1903, Mijaíl Tsvet, botánicu rusu, llogró dixebrar un amiestu de pigmentos de plantes (clorofiles) nuna columna de carbonatu de calciu. Más tarde, en 1910, cromatografió un estractu de yema de güevu nuna columna d'inulina. Les sos investigaciones, sicasí, nun fueron utilizaes por otros investigadores hasta 1931. Esta demoranza quiciabes se debió al fechu de que los trabayos de Tsvet fueron publicaos en rusu y nuna revista que nun tenía amplia circulación.
El rápidu desenvolvimientu de la cromatografía como ferramienta analítico sensible nun asocedió hasta 1931, cuando Kuhn, con Lederer y con Winterstein, emplegó la téunica pal analís de pigmentos de plantes, confirmando los primeros trabayos de Tsvet y la so predicción de que'l carotenu nun yera una sola sustancia, sinón un amiestu de dellos homólogos estrechamente rellacionaos. Coles mesmes, el tamañu de les columnes emplegaes foi aumentando pa poder recuperar los componentes separaos. La téunica, poro, nun yera solo analítica sinón preparatoria.
La cromatografía en columna por estos tiempu tenía aplicaciones llindaes, yá que los componentes que podíen dixebrase yeren invariablemente lípidos. Pasaron 10 años primero que Martin y Synge desenvolvieren una téunica por aciu la cual pudieren dixebrase compuestos aguacientos o hidrofílicos. Esto marcó un nuevu interés na téunica y en 1944 Consden, Gordon y Martin llograron dixebrar amiestos complexos d'aminoácidos en papel y fueron premiaos col Premiu Nobel polos sos trabayos. Al poco tiempu, en 1947, n'Estaos Xuníos de Norteamérica, la Comisión d'Enerxía Atómica dio a conocer información sobre l'usu de la cromatografía d'intercambiu iónicu pa la separación de productos de fisión nuclear.
El desenvolvimientu más recién nel campu de la cromatografía derivar de los trabayos de Stahl, quien en 1956 presentó una téunica práutica por aciu la cual una capa delgada xil xel, celulosa o alúmina yera tremada sobre una placa de vidriu. Esta téunica, llamada cromatografía de capa fina, resultó nun analís más rápidu y más sensible pal exame d'amiestos complexos y, en munchos casos, sustituyó a otros métodos similares más antiguos de cromatografía en papel toche.
En 1959, Porath y Flodin introducieron una nueva téunica llamada cromatografía de filtración de xel. Esta haise convertíu nuna poderosa y nueva ferramienta pa la separación de sustancies d'altu pesu molecular, particularmente les proteínes, y atopó munches aplicaciones nos campos de la bioquímica, la medicina, la fisioloxía y la bioloxía. La mayoría de les téuniques de filtración en xel utilicen columnes y apocayá fixéronse trabayos con una combinación de filtración en xel y materiales d'intercambiu iónicu, llogrando que les separaciones complexes sían desaxeradamente rápides y eficientes.
Los primeros equipos de cromatografía de gases apaecieron nel mercáu a mediaos del sieglu XX. De la mesma, la cromatografía líquida d'alta resolución (HPLC High Performance Liquid Chromatography, n'inglés) empezó a desenvolvese nos años 1960, aumentando la so importancia nes décades siguientes, hasta convertise na téunica cromatográfica más emplegada. Sicasí esto dirá modificando col pasu de los años.
Les distintes téuniques cromatográfiques[2] pueden estremase según cómo tea dispuesta la fase estacionaria:
La cromatografía de gases aplicar a numberosos compuestos orgánicos. Nel casu de compuestos non volátiles, recurrir a procesos denominaos de "derivatización", con cuenta de convertilos n'otros compuestos que se volatilicen nes condiciones d'analises.
Dientro de la cromatografía líquida, destaca la cromatografía líquida d'alta resolución (HPLC, del inglés High Performance Liquid Chromatography), que ye la téunica cromatográfica más emplegada na actualidá, de normal na so modalidá de fase reversa, na que la fase estacionaria tien calter non polar, y la fase móvil tien calter polar (xeneralmente agua o amiestos con elevada proporción de la mesma o d'otros disolvente polares, como por casu, metanol). El nome de "reversa" vien dau porque tradicionalmente la fase estacionaria taba compuesta de xil o alúmina, de calter polar, y por tanto la fase móvil yera un disolvente orgánicu pocu polar. Una serie eluotrópica ye un rangu de sustancies de distintes polaridaes qu'actúen como fase móvil y que dexen reparar un meyor desplazamientu sobre una fase estacionaria.
Tipos | Fase móvil | Fase estacionaria |----- | Cromatografía en papel | Líquidu |
align="center" | Papel de celulosa. |
Cromatografía en capa fina | Líquidu |
align="center" | Xel de xil o alúmina. | |||
Cromatografía de gases | Gas | Columnes capilares de xil fundida, con recubrimientos internos de dellos tipos de siloxanos enllazaos, columnes empaquetadas con tierres diatomees feches de tubos de vidriu o metal. | ||
Cromatografía líquida en fase reversa |
Líquidu (polar) | Rellenu de siloxano de octilo o siloxano de octadecilo. | ||
Cromatografía líquida en fase normal |
Líquidu (menos polar) |
Rellenu de xil, alúmina o un soporte al que se xunen químicamente grupos polares (ciano, amino, etc). | ||
Cromatografía líquida d'intercambiu iónicu |
Líquidu (polar) | Resines d'intercambiu iónicu. | ||
Cromatografía líquida d'esclusión |
Líquidu |
align="center" | Rellenu de pequeñes partícules de xil o polímeros con rede de poros uniforme. | |||
Cromatografía líquida de adsorción |
Líquidu |
align="center" | Partícules finamente estremaes de xil o d'alúmina. | |||
Cromatografía de fluyíos supercríticos |
Líquidu |
align="center" | Columnes abiertes de xil fundida con recubrimientos internos de dellos tipos de siloxanos enllazaos y d'enllaces cruzaos. |